HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南：總結(jié)

· 緩沖液可用于RP-HPLC分離，以控制離子化化合物的保留。通常，我們需要抑制分析物發(fā)生電離，以最大化樣品保留。這意味著，不管是
對(duì)于酸性或堿性溶劑，其流動(dòng)相的pH值（理想情況下）應(yīng)至少低于或高于樣品pKa值2個(gè)pH單位。

· 為了實(shí)現(xiàn)最佳的緩沖效果，緩沖液的pKa值應(yīng)在±1個(gè)pH單位內(nèi)。

鑒于樣品和緩沖液的這些特性，應(yīng)根據(jù)表1和表2，謹(jǐn)慎選擇緩沖液。

· 對(duì)于LC-UV分析，磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液最為常用；醋酸鹽 - 磷酸鹽組合使用，可提供2<pH<8的范圍，這涵蓋了大多數(shù)RP-HPLC色譜柱的穩(wěn)定性。

· 對(duì)于LC-MS應(yīng)用，緩沖液必須易揮發(fā)，所以緩沖液的選擇更加有限。
甲酸鹽、醋酸鹽、氨和碳酸氫鹽（表1和2）的各種組合可廣泛適用于LC-MS。

· 對(duì)于許多LC-UV和LC-MS方法，較低的pH值比緩沖效果更加重要，因此可以使用0.1％磷酸（UV）或甲酸（MS）酸來(lái)滿足這一要求。

鑒于目前高純度色譜柱的低硅烷醇活性，以及低濃度的分析物分子，最終流動(dòng)相只要含有5-10mM的緩沖液，就能滿足大多數(shù)應(yīng)用的需求。

· 如果通過(guò)混合的方式制備流動(dòng)相（A容器和B容器分別裝有緩沖液和有機(jī)溶劑），應(yīng)將緩沖液濃度控制在25mM以下，可避免緩沖液和有機(jī)溶劑混合時(shí)產(chǎn)生沉淀。

一些HPLC系統(tǒng)在混合過(guò)程中能比其他系統(tǒng)更有效的避免沉淀的產(chǎn)生。如果需要測(cè)量沉淀，可將緩沖液逐滴添加到有機(jī)溶劑的試管中（反之亦然）。如果觀察到沉淀，則應(yīng)在混合緩沖液和有機(jī)溶劑之前稀釋緩沖液。

· 最后，應(yīng)注意避免沾染污染物，制備后應(yīng)過(guò)濾緩沖液；如果不使用系統(tǒng)，請(qǐng)勿在系統(tǒng)中殘留緩沖液。

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作者：

John Dolan是LCGC和LCGC歐洲的“LC故障排除”專欄撰稿人。

在250多期的專欄文章之外，Dolan博士還發(fā)表了100多篇HPLC相關(guān)的論文。

他的研究領(lǐng)域涵蓋方法開(kāi)發(fā)、色譜柱表征和梯度洗脫等方面。

他還從事與HPLC相關(guān)的儀器設(shè)計(jì)、軟件編寫(xiě)、合同實(shí)驗(yàn)室管理以及教授HPLC技術(shù)等工作。

目前，John是LCResources公司的負(fù)責(zé)人。

LC Resources是一家致力于色譜技術(shù)培訓(xùn)和色譜問(wèn)題咨詢的公司。

他在本指南中與我們分享了與緩沖液使用相關(guān)的專業(yè)知識(shí)。

有關(guān)John課程的更多信息，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)LC Resources網(wǎng)站：www.LCResources.com